产甲烷菌在C57BL/6小鼠肥胖模型消化道不同部位的分布及其相关性研究

【摘要】：目的：研究史氏产甲烷菌(Methanobrevibacter smithii)在C57BL/6小鼠及其饮食诱导肥胖(Diet-induced Obesity, DIO)模型消化道不同部位的分布情况,探索史氏产甲烷菌与肥胖的相关性。 方法：将20只4周龄SPF级正常C57BL/6小鼠随机分成普通饲料喂养组(普食组)和高脂饲料喂养组(高脂组),饲养于SPF级小鼠实验动物房12周,每周称取体重一次,高脂组小鼠体重达到肥胖模型的标准(高脂组小鼠体重比普食组小鼠体重平均增加20%)后行肠道解剖,分别取两组小鼠的十二指肠、小肠上段、小肠中段、小肠下段、盲肠、结肠远端及其内容物,提取肠道细菌DNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)技术检测两组小鼠不同肠段的史氏产甲烷菌的分布情况,并分析肥胖与史氏产甲烷菌之间的相关性。 结果： (1)高脂组小鼠体重为39.46+1.53g,普食组小鼠体重为30.63±1.39g,高脂组小鼠体重显著高于普食正常组小鼠体重(P0.01),高脂组小鼠体重比普食组小鼠体重平均增加28.8%,达到肥胖标准(以高脂组体重超过正常对照组体重的20%为标准),DIO动物模型造模成功。 (2)普食组和高脂组C57BL/6小鼠小肠及大肠中,均检测到了史氏产甲烷菌。将普食组3只小鼠肠道不同部位的史氏产甲烷菌菌量行两两之间的比较得P值均大于0.05,差异无统计学意义。而高脂组3只小鼠肠道不同部位的史氏产甲烷菌菌量,各肠段的菌量丰度在小肠较大肠明显增大,以小肠中段的菌量丰度最大,其次为小肠上段和下段。同样将其行两两之间的比较：十二指肠、小肠上段、小肠中段、小肠下段中的史氏产甲烷菌菌量明显大于盲肠、结肠远端的菌量,且以小肠中段为最高(P0.05)；小肠中段中的史氏产甲烷菌菌量明显大于十二指肠、小肠上段、小肠下段(P0.05)。 (3)高脂组小鼠十二指肠、小肠上段、小肠中段和小肠下段史氏产甲烷菌菌量大于普食组小鼠相应部位的菌量,而盲肠和结肠远端结果却相反。行两组小鼠相同部位之间菌量的比较,结果显示两组小鼠之间在小肠中段和小肠下段处的比较P0.05,即高脂组小鼠小肠中段和小肠下段处史氏产甲烷菌菌量明显大于普食组小鼠该部位的史氏产甲烷菌菌量,差异有统计学意义；其余部位两组之间比较P0.05,差异无统计学意义,即在十二指肠、小肠上段、盲肠、结肠远端处,两组小鼠史氏产甲烷菌菌量无明显差异。 结论： (1)脂肪含量为60%的高脂饲料能在较短时间内建立C57BL/6小鼠DIO动物模型。 (2)C57BL/6小鼠的小肠和大肠中均有史氏产甲烷菌的分布。 (3)DIO成模小鼠小肠中段、下段较普食组小鼠小肠中段、下段史氏产甲烷菌菌量明显增高,提示小肠中段和下段史氏产甲烷菌菌量增高可能与肥胖正相关。 【关键词】：肠道菌群 史氏产甲烷菌 肥胖
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R-332;R589.2
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 目录10-11
• 1. 前言11-15
• 2. 材料与方法15-24
• 2.1 主要仪器和设备15-16
• 2.2 试剂和耗材16-17
• 2.3 溶液和培养基的配置17
• 2.4 史氏产甲烷菌16S rRNA荧光定量PCR引物序列17
• 2.5 实验对象及方法步骤17-24
• 3. 结果24-34
• 3.1 C57BL/6小鼠肥胖模型造模结果24-25
• 3.2 标准曲线的建立25-27
• 3.3 两组小鼠肠道史氏产甲烷菌实时荧光定量PCR检测CT值及拷贝数结果27-34
• 4. 讨论34-40
• 5. 结论40-41
• 参考文献41-44
• 综述44-55
• 参考文献51-55
• 攻读学位期间主要的研究成果目录55-56
• 致谢56

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