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甲烷氧化混合菌群的富集培养及其治理瓦斯工艺研究

来源:论文学术网
时间:2024-08-18 20:59:54
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甲烷氧化混合菌群的富集培养及其治理瓦斯工艺研究【摘要】:甲烷氧化菌能在温和条件下特异的利用甲烷,具有应用于甲烷减排和煤矿瓦斯治理的潜力。本论文在对我国典型煤矿土壤的甲烷氧化菌进行分

【摘要】:甲烷氧化菌能在温和条件下特异的利用甲烷,具有应用于甲烷减排和煤矿瓦斯治理的潜力。本论文在对我国典型煤矿土壤的甲烷氧化菌进行分子生态学分析的基础上,确定甲烷氧化混合菌的富集培养策略,获得高效利用甲烷的稳定混合菌群,对其特性和功能进行研究,实现大规模发酵培养,并在实验室和煤矿现场进行了瓦斯治理实验。 用多种分子生态学方法解析了瓦斯煤矿土壤中的甲烷氧化菌及相关微生物的组成信息。该样品含有大量的甲烷氧化菌及甲基氧化菌,其中甲烷氧化菌以Ⅰ型为主,Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅹ型甲烷氧化菌的含量分别为78.6%、7.1%和14.3%。 分别以甲烷气和人工瓦斯气作为唯一碳源对土壤样品进行好氧选择性传代培养。富集过程中甲烷和乙烷的消耗能力得到显著强化,总细菌的多样性逐渐减少,Ⅰ型甲烷氧化菌则得到富集,20代以后菌群结构和甲烷去除能力趋于稳定。 研究了两种气体条件富集的混合菌群的特性,包括菌体形态、生长特性、代谢特性和微生物群落结构。驯化后Ⅱ型甲烷氧化菌数量增加,人工瓦斯气富集的混合菌菌群更丰富。混合菌比纯菌的甲烷消耗能力更强,且无代谢产物积累。菌群间的协同作用能有效避免产物抑制,有利于菌群结构和功能的稳定。 对两种条件得到的混合菌的功能进行了系统分析。其在甲烷浓度为3~50%时都有较好的去除效果,最高可达241 ml CH4 h~(-1) OD660~(-1) (L culture)~(-1)。在20~42oC都能有效的去除甲烷。对H_2S、CO和SO_2等毒性气体有很强的耐受性。混合菌保藏可用4oC充甲烷密封保存法、-80oC冻存菌体法和-80oC添加石蜡油冻存法。 以甲烷气富集的混合菌为对象,研究了甲烷氧化混合菌的大规模发酵培养。成功开展了5L-300L和5L-600L的放大发酵实验。混合菌在放大培养时,生长速度稳定,且随着发酵逐级放大,消耗甲烷能力以及菌群结构都能够保持稳定。 在实验室模拟煤层、生物过滤实验中研究混合菌去除甲烷的能力,并在河南三个矿井进行现场中试,将制备的菌液注入煤层并达饱和,甲烷去除效果显著,说明富集的甲烷氧化混合菌有在煤矿中治理瓦斯的应用潜力。 【关键词】:甲烷氧化菌 甲烷单加氧酶 分子生态学 发酵培养 煤矿瓦斯治理
【学位授予单位】:清华大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:X172
【目录】:
  • 摘要4-5
  • Abstract5-13
  • 第1章 文献综述13-39
  • 1.1 课题背景13-14
  • 1.2 甲烷氧化菌及甲烷单加氧酶14-24
  • 1.2.1 甲烷氧化菌的分类及特性16-20
  • 1.2.2 甲烷单加氧酶的基因与蛋白20-22
  • 1.2.3 甲烷单加氧酶的催化特性22-24
  • 1.3 甲烷氧化菌的应用研究热点24-31
  • 1.3.1 甲烷氧化菌的培养工艺研究25-27
  • 1.3.2 甲烷氧化菌的工业生物催化研究27-28
  • 1.3.3 甲烷氧化菌的生物修复研究28-29
  • 1.3.4 甲烷氧化菌及甲烷单加氧酶的基因工程研究29-30
  • 1.3.5 甲烷氧化菌的分子生态学研究30-31
  • 1.4 甲烷氧化菌在工业应用中存在的问题31-33
  • 1.5 应用甲烷氧化菌治理煤矿瓦斯33-36
  • 1.5.1 甲烷氧化菌在温室气体减排中的应用33-34
  • 1.5.2 煤矿瓦斯治理现状及生物治理的可行性34-36
  • 1.6 论文的主要研究内容36-39
  • 1.6.1 研究内容36-37
  • 1.6.2 研究框架37-39
  • 第2章 从煤矿土壤富集培养甲烷氧化混合菌39-64
  • 2.1 引言39-40
  • 2.2 实验材料与方法40-45
  • 2.2.1 DNA 提取和纯化40
  • 2.2.2 PCR 扩增16S rRNA 和功能基因40-41
  • 2.2.3 核酸限制性片段长度多态性分析41
  • 2.2.4 变性梯度凝胶电泳41-42
  • 2.2.5 DNA 序列分析42
  • 2.2.6 培养基及富集条件42-43
  • 2.2.7 甲烷、乙烷的检测方法43-45
  • 2.3 煤矿土壤的特性分析45-47
  • 2.4 煤矿土壤中甲烷氧化菌群落的功能基因解析47-54
  • 2.4.1 基于功能基因pmoA 的 RFLP 分析47-50
  • 2.4.2 基于功能基因mmoX 的RFLP 分析50-51
  • 2.4.3 基于功能基因mxaF 的RFLP 分析51-54
  • 2.5 不同条件从煤矿土壤富集甲烷氧化混合菌54-63
  • 2.5.1 对甲烷和乙烷的消耗能力的变化55-57
  • 2.5.2 富集过程的细菌群落变化57-59
  • 2.5.3 富集过程的I型甲烷氧化菌群落变化59-61
  • 2.5.4 富集过程的II型甲烷氧化菌群落变化61-63
  • 2.6 本章小结63-64
  • 第3章 甲烷氧化混合菌的特性分析64-90
  • 3.1 引言64-65
  • 3.2 实验材料与方法65-67
  • 3.2.1 菌种及培养方法65
  • 3.2.2 显微镜和扫描电镜观察65
  • 3.2.3 MMO 酶活测定65-66
  • 3.2.4 代谢分析66-67
  • 3.3 甲烷氧化混合菌的微生物群落分析67-81
  • 3.3.1 基于16S rRNA 的RFLP 分析67-72
  • 3.3.2 基于功能基因pmoA 的 RFLP 分析72-75
  • 3.3.3 基于功能基因mmoX 的RFLP 分析75-77
  • 3.3.4 基于功能基因mxaF 的RFLP 分析77-81
  • 3.4 甲烷氧化混合菌的生长特性研究81-86
  • 3.4.1 菌体形态81-83
  • 3.4.2 生长状况与干重曲线83-85
  • 3.4.3 甲烷消耗与MMO 酶活85-86
  • 3.5 甲烷氧化混合菌的代谢分析86-87
  • 3.6 甲烷氧化混合菌的协同作用机理87-88
  • 3.7 本章小结88-90
  • 第4章 甲烷氧化混合菌的功能分析和保藏90-103
  • 4.1 引言90-91
  • 4.2 实验材料与方法91
  • 4.2.1 评价方法91
  • 4.2.2 保藏方法91
  • 4.3 对不同浓度甲烷的消耗能力91-93
  • 4.4 不同温度下对甲烷的消耗能力93-95
  • 4.5 对毒性气体的耐受性95-97
  • 4.6 对煤矿瓦斯中甲烷的去除能力97-98
  • 4.7 甲烷氧化混合菌的保藏方法研究98-101
  • 4.8 本章小结101-103
  • 第5章 甲烷氧化混合菌的大规模发酵研究103-120
  • 5.1 引言103-104
  • 5.2 实验方法与装置104-108
  • 5.2.1 种子培养104
  • 5.2.2 5L 发酵罐培养104-105
  • 5.2.3 40L-300L 二联发酵罐105-107
  • 5.2.4 100L-600L 二联发酵罐107-108
  • 5.3 混合菌在5L 发酵罐的培养研究108-112
  • 5.3.1 生长特性108-110
  • 5.3.2 甲烷去除能力110-111
  • 5.3.3 菌群变化111-112
  • 5.4 混合菌放大发酵研究112-119
  • 5.4.1 5L-40L-300L 放大发酵112-113
  • 5.4.2 5L-100L-600L 放大发酵113-119
  • 5.5 本章小结119-120
  • 第6章 甲烷氧化混合菌治理煤矿瓦斯应用研究120-130
  • 6.1 引言120-121
  • 6.2 在实验室模拟煤层中去除甲烷121-122
  • 6.3 应用生物滤器去除甲烷122-124
  • 6.4 河南煤矿掘进煤层注入试验124-127
  • 6.4.1 禹州市军阳矿业矿井中试124-126
  • 6.4.2 禹州市神火集团矿井中试126-127
  • 6.4.3 河南永锦能源有限公司矿井中试127
  • 6.5 甲烷氧化混合菌治理瓦斯的前景分析127-129
  • 6.6 本章小结129-130
  • 结论130-134
  • 参考文献134-149
  • 致谢149-150
  • 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果150-151


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