绿色木霉的筛选及秸秆的二次组合发酵

【摘要】：本论文主要是对纤维素酶高产菌株的筛选及产酶条件的研究，以绿色木霉的7株菌为出发菌株，通过种子培养基和发酵培养基的处理，分别测其C_1、C_X、C_B和滤纸的酶活大小以及纤维素、木质素的降解率，来筛选出酶活力和降解率都高的优良菌株；通过绿色木霉(Trichodermaviride)和白腐真菌(white-rot fungi)的平板拮抗试验发现，需将两菌进行二步混合发酵，来降解秸秆；采用稻草麸皮比例、培养基含水量、混菌总接种量和混菌接种比例对绿色木霉(Trichoderma viride)和白腐真菌(white-rot fungi)混合发酵条件进行了优化；利用两级离体消化试验对发酵秸秆进行体外消化性的评价研究，结果如下： （1）以稻草为主要碳源时，绿色木霉化L4C和BS产CMC酶和滤纸酶的活性均为最高。分别为2438.4U/mL、2438.4U/mL和715.4U/mL、658.8U/mL；以小麦为主要碳源时，绿色木霉化L4C和BS产CMC酶和滤纸酶的活性均为最高。分别为2854.0U/mL、3237.7U/mL和880.5U/mL、865.7U/mL。 （2）绿色木霉和白腐真菌混菌发酵，结果表明两菌间隔接种时间6天最为适宜，最佳组合为O6-H10，即白腐真菌接种6天后，再接种绿色木霉培养10天。 （3）平菇和绿色木霉化L4C、BS在稻草培养基上的最优条件分别为：稻草与麦麸比为7:3、6:4，培养基中含水量为55%、45%，平菇和绿色木霉的总接种量为15%、25%，接种比例都为3:2。在此最佳发酵条件下，平菇和绿色木霉化L4C的半纤维素、纤维素、木质素降解率分别为36.4%、41.6%和48.1%，分别是单菌发酵的1.5倍、1.22倍、2.5倍；平菇和绿色木霉BS的半纤维素、纤维素、木质素降解率分别为31.4%、31.5%和52.9%，分别是单菌发酵的1.3倍、1.05倍、2.75倍。平菇和绿色木霉BS、化L4C在小麦培养基上的最优条件均为小麦与麸皮比例为7:3，培养基中含水量55%，总接种量为15%，接种比例为3:2。 （4）利用两级离体消化试验得出，混菌发酵的干物质的消化率可达到40%～60%，比没接种的秸秆消化率提高了1.79～2.82倍。 【关键词】：绿色木霉 秸秆降解菌 纤维素酶 秸秆降解
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：X172
【目录】：

• 摘要2-3
• Summary3-8
• 第一章 综述8-15
• 1 立题背景和意义8-9
• 2 秸秆的微生物处理方法9
• 3 发酵秸秆的菌种的要求9
• 4 降解纤维素的微生物种类9-11
• 4.1 霉菌产生的纤维素酶的研究进展10
• 4.2 绿色木霉的纤维素降解的酶系10-11
• 5 降解木质素的微生物种类11-12
• 5.1 白腐真菌的生物学背景11-12
• 5.2 白腐真菌木质素降解酶系12
• 6 混菌发酵的研究概况与进展12-13
• 7 产纤维素酶真菌混合发酵的应用前景13-15
• 第二章 不同绿色木霉菌株固态发酵酶活性的研究15-33
• 1 材料与方法15-19
• 1.1 试验材料15-17
• 1.2 试验设计17
• 1.3 试验方法17-19
• 1.4 数据统计与分析19
• 2 结果与分析19-31
• 2.1 绘制葡萄糖标准曲线19-20
• 2.2 不同绿色木霉菌株在培养基上的滤纸酶活测定20-22
• 2.3 不同绿色木霉菌株在培养基上的C_1酶活性测定22-25
• 2.4 不同绿色木霉菌株在培养基上的C_X酶活测定25-27
• 2.5 不同绿色木霉菌株在培养基上的C_B酶活测定27-29
• 2.6 稻草培养基中半纤维素、纤维素、木质素降解率29-30
• 2.7 小麦培养基中半纤维素、纤维素、木质素降解率30-31
• 3 小结31-33
• 3.1 初筛菌株的确定31-32
• 3.2 复筛菌株的确定32-33
• 第三章 混合菌固态发酵降解秸秆的研究33-44
• 1 材料与方法33-36
• 1.1 试验材料33-34
• 1.2 试验设计34-35
• 1.3 试验方法35-36
• 1.4 数据统计与分析36
• 2 结果与分析36-43
• 2.1 平菇产木质素酶的测定结果36-37
• 2.2 平菇和绿色木霉的平板拮抗试验结果37-38
• 2.3 绿色木霉BS和平菇组合对不同秸秆培养基的混合发酵测定38-40
• 2.4 绿色木霉化L4C和平菇组合对不同秸秆培养基的混合发酵测定40-43
• 3 小结43-44
• 第四章 混菌发酵组合条件的优化44-61
• 1 材料与方法44-46
• 1.1 试验材料44-45
• 1.2 试验设计45
• 1.3 试验方法45-46
• 1.4 数据统计与分析46
• 2 结果与分析46-60
• 2.1 混菌在培养基上的优化情况46-55
• 2.2 正交试验筛选最佳发酵条件55-60
• 3 小结60-61
• 第五章 两级离体消化试验61-65
• 1 材料与方法62-64
• 1.1 试验材料62-63
• 1.2 试验方法63
• 1.3 数据统计与分析63-64
• 2 结果与分析64
• 3 小结64-65
• 第六章 整体结论65-66
• 致谢66-67
• 参考文献67-72
• 作者简介72-73
• 导师简介73-74

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