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利用玉米秸秆半纤维素降解产物发酵产乙醇菌株的筛选

来源:论文学术网
时间:2024-08-18 21:55:14
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利用玉米秸秆半纤维素降解产物发酵产乙醇菌株的筛选【摘要】:煤炭、石油资源枯竭,地球污染在日益加重,人类现在亟需寻找一种新的能源以便能够改变目前这种严峻的能源危机。乙醇作为一种清洁高

【摘要】:煤炭、石油资源枯竭,地球污染在日益加重,人类现在亟需寻找一种新的能源以便能够改变目前这种严峻的能源危机。乙醇作为一种清洁高效的能源,早已被世界各国所关注。地球上每年都产生数以万计的木质纤维素,这也为发展燃料乙醇产业提供了丰富的原材料。目前,国内纤维素作为发酵乙醇的原料,其利用率远低于国外最好水平,主要原因是产乙醇菌株对秸秆中半纤维素降解产物木糖的糖醇转换率较低。 本研究对从保定周边秸秆堆积场所采集到的样品进行高效利用木糖产乙醇菌株的筛选,同时还筛选得到产半纤维素酶菌株,并以玉米秸秆稀酸水解液和半纤维素酶酶解液为原料,进行了乙醇发酵的初步探索和比较。 分离、筛选得到6株可利用木糖发酵产乙醇的菌株,初始木糖40.0g/L,(NH_4)_2SO_45.0g/L,KH_2PO_41.0g/L,酵母粉0.5g/L,MgSO_47H_2O0.5g/L,pH6.5条件下,利用木糖发酵产乙醇能力在10.46g/L-12.38g/L之间,木糖利用率在68.75%-79.17%之间,乙醇得率在0.35g/g-0.41g/g之间。对发酵时间和培养基成分优化后,初始性能最佳的菌株M-105在木糖50.0g/L,(NH_4)_2SO_45.5g/L,KH_2PO_41.0g/L,酵母粉1.5g/L,MgSO_47H_2O2.0g/L,pH6.5条件下发酵60h,乙醇产量和木糖利用率分别达23.37g/L和98.85%,乙醇得率达到了0.471g/g。筛选得到16株产半纤维素酶菌株,其中只有3-B009菌株酶活性较稳,且酶活力相对较高;在对其进行发酵条件优化后,半纤维素酶活力达341.94U/mL(17097U/g)。 在此基础之上,用2%的稀硫酸对玉米秸秆进行了预处理,脱毒得到玉米秸秆水解液,HLPC-示差折光法测得浓缩水解液木糖含量为46.62g/L,不含葡萄糖。利用M-105菌株发酵水解液,乙醇产量和木糖利用率分别为10.29g/L和61.39%。利用3-B009发酵所得半纤维素酶粗酶液处理玉米秸秆,优化酶液用量后,酶解48h,木糖含量5.093g/L。半纤维素水解率较低,尚无法直接用于发酵。 基于26SrDNAD1/D2结构域序列的系统发育分析和初步鉴定表明,高效发酵木糖产乙醇的菌株M-105为热带假丝酵母(Candidatropicalis);在土豆汁木糖培养基培养5d可形成假菌丝。根据基于16SrDNA序列的系统发育分析,半纤维素酶产生菌3-B009属于类诺卡氏属(Nocardioides);高氏一号培养基28℃培养3d,基丝断裂、形成断裂小体。 【关键词】:乙醇 玉米秸秆 木糖 半纤维素酶 热带假丝酵
【学位授予单位】:河北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:TQ223.122;Q93
【目录】:
  • 摘要5-7
  • Abstract7-13
  • 第1章 绪论13-24
  • 1.1 概述13
  • 1.2 木质纤维素发酵生产乙醇的发展现状及其展望13-16
  • 1.2.1 国内木质纤维素生产乙醇发展现状13-14
  • 1.2.2 国外木质纤维素生产乙醇发展现状14-15
  • 1.2.3 木质纤维素发酵生产乙醇展望15-16
  • 1.3 玉米秸秆预处理及其脱毒研究16-20
  • 1.3.1 玉米秸秆预处理研究16-19
  • 1.3.2 玉米秸秆水解液的脱毒研究19-20
  • 1.4 玉米秸秆发酵制乙醇技术研究20-22
  • 1.4.1 一步发酵法20
  • 1.4.2 两步发酵法20-21
  • 1.4.3 同步糖化发酵法21
  • 1.4.4 非等温同步糖化发酵法21
  • 1.4.5 固定化方法21-22
  • 1.5 微生物代谢木糖产乙醇机理22-23
  • 1.6 本课题研究目的、意义及技术路线23-24
  • 1.6.1 本课题研究目的和意义23
  • 1.6.2 本课题研究技术路线23-24
  • 第2章 高效利用木糖产乙醇菌株筛选24-40
  • 2.1 实验材料24-26
  • 2.1.1 实验样品24
  • 2.1.2 主要培养基24-25
  • 2.1.3 主要试剂25
  • 2.1.4 实验主要仪器25-26
  • 2.2 实验方法26-27
  • 2.2.1 样品富集26
  • 2.2.2 菌种的分离与纯化26
  • 2.2.3 菌种的初筛26
  • 2.2.4 菌种的复筛26
  • 2.2.5 菌株发酵木糖产乙醇稳定性测定26-27
  • 2.2.6 菌株发酵条件的优化27
  • 2.3 实验结果与讨论27-38
  • 2.3.1 初筛结果27
  • 2.3.2 复筛结果27-28
  • 2.3.3 利用木糖发酵性能测定结果28-32
  • 2.3.4 菌株发酵条件的优化结果32-38
  • 2.4 小结38-40
  • 第3章 玉米秸秆水解液的制备及其发酵产乙醇40-47
  • 3.1 实验材料40
  • 3.1.1 菌种40
  • 3.1.2 实验主要试剂40
  • 3.1.3 实验仪器40
  • 3.2 实验方法40-41
  • 3.2.1 玉米秸秆水解液的制备40
  • 3.2.2 木糖、葡萄糖标准曲线的制作40-41
  • 3.2.3 玉米秸秆水解液的主要成分分析41
  • 3.2.4 玉米秸秆水解液的脱毒及其发酵产乙醇41
  • 3.3 实验结果与讨论41-46
  • 3.3.1 玉米秸秆水解液的主要成分分析41-45
  • 3.3.2 玉米秸秆水解液脱毒及发酵产乙醇45-46
  • 3.4 小结46-47
  • 第4章 高效降解半纤维素菌株的筛选47-56
  • 4.1 实验材料47-48
  • 4.1.1 实验样品47
  • 4.1.2 实验主要培养基47
  • 4.1.3 实验主要试剂47
  • 4.1.4 实验仪器47-48
  • 4.2 实验方法48-49
  • 4.2.1 样品富集48
  • 4.2.2 菌种的分离与初筛48
  • 4.2.3 分离菌的纯化48
  • 4.2.4 菌种的复筛48
  • 4.2.5 木糖标准曲线的制作48
  • 4.2.6 半纤维素酶活力的测定48-49
  • 4.2.7 利用半纤维素酶的粗酶液处理玉米秸秆49
  • 4.3 实验结果与讨论49-53
  • 4.3.1 初筛结果49
  • 4.3.2 复筛结果49-50
  • 4.3.3 对 3-B009 产酶发酵条件的优化50-53
  • 4.4 半纤维素粗酶液处理玉米秸秆53-55
  • 4.4.1 粗酶液处理玉米秸秆时间的优化53-54
  • 4.4.2 粗酶液加酶量的优化54-55
  • 4.5 小结55-56
  • 第5章 菌株 M-105 和 3-B009 的初步鉴定56-66
  • 5.1 实验材料56-57
  • 5.1.1 菌株来源56
  • 5.1.2 主要培养基56
  • 5.1.3 主要试剂56-57
  • 5.1.4 主要仪器57
  • 5.2 实验方法57-61
  • 5.2.1 培养和形态特征鉴定57-58
  • 5.2.2 菌株系统发育地位分析58-60
  • 5.2.3 酵母菌 M-105 生理生化特征鉴定60-61
  • 5.3 实验结果61-65
  • 5.3.1 M-105 菌落形态特征61-62
  • 5.3.2 3-B009 培养和形态特征62-63
  • 5.3.3 PCR 产物电泳检测结果63
  • 5.3.4 系统发育树63-64
  • 5.3.5 酵母菌 M-105 生理生化鉴定64-65
  • 5.4 小结65-66
  • 结论66-67
  • 参考文献67-71
  • 致谢71-72
  • 攻读学位期间取得的科研成果72


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