7-二氟亚甲基-5，4’-二甲烷氧基异黄酮对过氧化氢诱导的血管内皮氧化应激损伤的保护作用研究

【摘要】： 目的：以金雀异黄素为先导化合物，通过定向化学结构改造，获得一系列金雀异黄素的衍生物，通过建立血管内皮氧化应激损伤模型，从中筛选出一种较先导化合物更有效的对血管内皮氧化应激损伤具有保护作用的活性新化学实体，即7—二氟亚甲基—5，4’—二甲烷氧基异黄酮。研究该活性新化学实体对体外培养血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用以及抗氧化、抗粘附、抗炎症作用，并初步探讨其作用机制，为寻找具有开发前景的心血管疾病防治新型候选药物提供实验依据。 方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，用H_2O_2孵育细胞24小时，通过检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性和细胞凋亡率，建立氧化诱导内皮细胞损伤和凋亡模型。用氧化诱导内皮细胞损伤和凋亡模型，筛选出一种活性新化学实体进行进一步实验研究。实验分组如下(1)空白对照组(2)H_2O_2损伤组(3)溶媒对照组(4)先导化合物组(5)7—二氟亚甲基—5，4’-二甲烷氧基异黄酮组(6)阳性药物对照组。应用MTT比色法和台盼蓝染色细胞计数法检测内皮细胞生长和增殖活性；吖啶橙染色荧光显微镜观察和PI染色FCM分析内皮细胞凋亡程度；DCFH-DA激活荧光FCM测定内皮细胞活性氧含量；荧光分光光度计检测内皮细胞和单核细胞粘附率；ELISA法测定内皮细胞培养液上清中E-Selectin和ICAM-1的浓度；ELISA法测定内皮细胞和单核细胞培养液上清中IL-6和TNF-α的浓度；Western Blot检测内皮细胞磷酸化ERK1／2、NF-κB、Caspase-3的表达。 结果：H_2O_2(1.0mmol／L)孵育内皮细胞24h，LDH释放增多，细胞凋亡率升高。不同浓度的金雀异黄素衍生物预处理细胞后发现：(1)在先导化合物(5，7，4’—三羟基黄酮)基本结构基础上，C-7位引入二氟亚甲基获得的7—二氟亚甲基—5，4’—二羟基异黄酮较金雀异黄素抗血管内皮氧化应激损伤活性有一定程度提高。(2)全部供试品中，7—二氟亚甲基—5，4’—二甲烷氧基异黄酮抗血管内皮氧化应激损伤活性最高。 H_2O_2(1.0mmol／L)孵育内皮细胞24h，LDH活性增高；内皮细胞生长和增殖受到明显抑制；细胞凋亡增多；内皮细胞活性氧显著升高；内皮细胞和单核细胞的粘附增多，内皮细胞粘附分子E-SelecEin和ICAM-1的释放增加；炎症因子IL-6和TNF-α释放亦增加；内皮细胞NF-κB、磷酸化ERK1／2和Caspase-3的表达上调。用7—二氟亚甲基—5，4’-二甲烷氧基异黄酮预先保护后可见：(1)细胞生长和增殖活性呈浓度依赖性升高，LDH释放减少；细胞凋亡率呈浓度依赖性降低；活性氧升高明显受抑。(2)血管内皮细胞和单核细胞的粘附率呈浓度依赖性降低，内皮细胞E-Selectin和ICAM-1的释放减少。(3)内皮细胞和单核细胞炎症因子IL-6和TNF-α的释放减少。(4)内皮细胞磷酸化ERK1／2、NF-κB和Caspase-3的表达下调。 结论： 1、7—二氟亚甲基—5，4’—二甲烷氧基异黄酮对血管内皮氧化应激损伤具有保护作用。 2、7—二氟亚甲基—5，4’—二甲烷氧基异黄酮具有显著抗氧化作用。 3、7—二氟亚甲基—5，4’—二甲烷氧基异黄酮通过抑制E-Selectin、ICAM-1的释放发挥拮抗氧化应激损伤血管内皮细胞与单核细胞粘附的作用。 4、7—二氟亚甲基—5，4’—二甲烷氧基异黄酮通过抑制氧化应激损伤血管内皮细胞炎症因子IL-6、TNF-α的释放，从而抑制氧化应激损伤血管内皮介导的炎症反应。 5、7—二氟亚甲基—5，4’—二甲烷氧基异黄酮的血管内皮氧化应激损伤保护作用与下调磷酸化ERK1／2的表达，抑制NF-κB、Caspase-3的活性有关。 【关键词】：金雀异黄素 7-二氟亚甲基-5 4’-二甲烷氧基异黄酮 内皮细胞 氧化应激 保护作用
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R96
【目录】：

• 一、中文摘要4-6
• 二、英文摘要6-9
• 三、论文正文9-51
• (一) 前言9-12
• (二) 实验材料12-17
• (三) 实验方法17-24
• (四) 实验结果24-41
• (五) 讨论41-46
• (六) 结论46-47
• (七) 参考文献47-51
• 四、综述51-68
• 五、附录68-71
• 六、致谢71

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