改进TAIL-PCR方法克隆产甲烷古菌的mcr基因簇

【摘要】：甲基辅酶M还原酶(MCR)在产甲烷古菌中普遍存在并具有重要意义,其基因成簇存在,约5.8 kb,其中α亚基核酸序列相对保守,是较易获得的保守序列.为了快速和简便地获得mcr基因簇,本研究根据甲基辅酶M还原酶β亚基(MCRB)的蛋白基序和密码子表设计了4条AD引物,经过改良的TAIL-PCR发现其中3条AD引物都获得了大于3 kb并且正确的片段.本研究所获得的基因可为甲基辅酶M还原酶的深入研究奠定基础,相较于传统的TAIL-PCR方法,本研究对其的改进拓宽了其在获得大片段基因簇及侧翼序列方面的适用性,并可为其他类似基因簇的获得提供参考. 【作者单位】： 农业部沼气科学研究所农业部农村可再生能源开发利用重点实验室;
【关键词】： TAIL-PCR AD引物设计 甲基辅酶M还原酶 产甲烷古菌 mcr基因簇
【基金】：“十二五”国家科技支撑计划项目(2011BAD15B03) “十一五”国家科技支撑计划项目(2010BAD03B01)资助~~
【分类号】：Q78
【正文快照】： 染色体步移(Chromosome walking)是指根据基因组DNA中已知的核酸序列,获得该已知片段的上游或下游的未知序列的方法[1].基于PCR的染色体步移技术有反向PCR[2-3]、连接介导PCR[4-7]和随机引物PCR[8-11].运用比较广泛的是刘耀光等于1995年开发出的热不对称交错PCR(Thermal asymm

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