提取植物叶片中的水杨酸及测定其含量的方法

【专家解说】：答： 一般采用柳树，杨树，冬青树皮或猕猴桃果实等来提，当然杨柳科的树叶中水杨酸含量也是很高的。 水杨酸(salicylic acid，SA)是一种植物界广泛存在的天然物质，它不仅具有重要的药理效应，而且对植物生长发育过程以及植物抗病性方面有着广泛的调控作用 。SA处理可以延缓多种果实的成熟衰老进程。通过测定果实成熟衰老过程中组织内源SA水平的变化，可以更好了解果实成熟衰老机理，为SA及其衍生物调控果实成熟衰老进程积累基础。但是植物组织中内源SA水平很低，一般在1．0～8．4p~g／g之间_4-一-，果实组织中含量则相对更低，因此如何更有效地提取组织中的SA，并配以更灵敏的检测方法，是研究SA对果实成熟衰老调控的重要内容。 现有的植物组织内源SA提取方法比较复杂，要经过提取、液液分配、蒸干等多个步骤，回收率较低，一般在34．0％～80．7％之间，而血液中SA的提取是通过乙醚或乙醚与石油醚混合物一步萃取法，较现有的植物组织中SA提取法更为简便。 1，提取方法： 取l0．0g叶片充分研磨后，置于50mL的离心管中， 加4．0mL 5％ 的三氯乙酸， 加水至20．0mL后再加入30．0mL乙醚，充分摇匀，浸提12h， 于l 000~g下离心5.0min，取出上部乙醚相，水相再经乙醚重复提取2次，合并乙醚相，真空旋转蒸干后，加入1．0mL 50％甲醇50％乙酸缓冲液(pH3．2)的混合液将其溶解，置于Ep— pendorf管中保存，即为游离态SA样品。水相加l8．5％的HCI至终浓度为3．2％，于80cI=水浴中加热1．0h，冷却后用乙醚提取3次，合并乙醚相，蒸干后加入1．0mL 50％ 甲醇+50％乙酸缓冲液(pH3．2)的混合液溶解，置于Eppendorf管中保存，即为结合态SA样品。样品经0，3 Ixm 的微孑L过滤器过滤后，用高效液相色谱(HPLC)进 行检测。 2，测定含量 1-2 主要仪器与试剂 主要仪器：Beckman高效液相色谱仪(带化学工作站)，岛津荧光检测器，Heidolp旋转蒸发仪(德国)。 SA标准品，上海五联化工厂生产；甲醇为色谱纯，天津市四友生物医学技术有限公司生产；其余所用试剂均为分析纯；水(二次蒸馏水，自制)。 HPLC检测条件 Cl8柱，7．3mm~20cm；流动相： 甲醇：乙酸缓冲液(pH3．2)=50：50；岛津荧光检测器(激发波长为310nm，发射波长为415nm)；流速为1．0mIMmin；进样量为201xL。 1．5 标准曲线的建立 用50％甲醇+50％乙酸缓冲液(pH3．2)的混合液配制浓度为l，0m g／mL的SA溶液，再稀释成0、0．25、0．5、l，0、2，01xg／mL的标准溶液，将不同浓度的标准溶液用HPLC测定，得到标准曲线。 具体参考文献： 题目：《猕猴桃果实中内源水杨酸的提取、测定及其在采后研究中的应用》猕猴桃果实中内源水杨酸的提取、测定及其在采后研究中的应用=Extraction and Determination of Endogenous Salicylic Acid from Kiwifruit and Its Application to Postharvest Research[刊，中]/张玉（浙江大学果实分子生理与生物技术实验室，杭州 310029），陈昆松，张上隆//中国食品学报.—2004，4（3）.—6～9 摘要：建立一种更有效的水杨酸（SA）提取、测定方法是了解SA对采后果实成熟衰老生理影响和调控机理的基础。本文采用乙醚一步萃取法提取猕猴桃果实组织中内源SA，用高效液相色谱法（荧光检测器）测定其含量。结果显示，本方法回收率为（96.4±3.0）%，显著高于其它已报道的方法，最低检测限为0.9ng／g·FW。SA的荧光峰面积与浓度在0～2.0μg／mL范围内呈线性关系，达到极显著水平（r＝0.9991**），该方法简便易行，样品提取时间比以往报道的方法节省一半，因此可用于成熟果实组织中的内源SA萃取和测定。图4表1参12。 可以到VIP网上详细查询