葡萄籽中提取原花色素并进行其含量测定的详细步骤

【专家解说】：原花色素在自然界中广泛分布于油菜籽、葡萄、 蓝莓、樱桃、李子、落叶松、野杨梅等植物的皮中, 因其具有独特的功能, 被用于医药、化妆品和保健食 品。葡萄籽是葡萄酒、葡萄汁生产中的副产物, 常常 作饲料或垃圾被扔掉, 造成了资源的浪费和环境的污 染。因此, 本文探讨了利用葡萄籽提取原花色素工艺。 1 材料与方法 1 . 1 试验材料 葡萄籽、无水乙醇( AR ) 、甲醇( AR ) 、丙酮 ( AR ) 、浓盐酸( AR ) 、香草醛( AR ) 、石油醚( AR ) 、 原花色素标准品( AR ) 。 1 . 2 仪器设备 粉碎机、离心机、紫外分光光度计、电子天平、 超声波振荡器、真空干燥箱、真空泵。 1 . 3 原花色素制备方法 葡萄籽洗净晾干, 粉碎, 石油醚脱脂备用。称取 5g 经脱脂的葡萄籽干粉置于烧杯中, 加入25 mL 70 % 浓度乙醇水溶液, 将烧杯放入超声波振荡器, 振 荡10 min 后, 将烧杯中葡萄籽粉的乙醇水溶液全部移 入三口烧瓶, 搅拌( 搅拌速度不要太快) , 加热升温至 70℃, 恒温60 min 后, 趁热过滤, 收集滤液、滤渣。 将滤渣置于三口烧瓶, 加入溶剂, 按第一次提取条件 进行第二、第三次提取, 70% 乙醇水用量均为22.5 mL, 提取时间均为30 min , 收集每次滤液。合并三次滤液 进行蒸馏、干燥即得原花色素产品。 1 . 4 原花色素含量测定 ( 1 ) 标准溶液的配置。准确称取10.4mg 原花色素 化学对照品, 用无水乙醇溶解, 并准确定容至100mL, 配制成浓度为104.0μg / mL 的标准液。 ( 2 ) 原花色素吸光度与波长关系测定。 原花色素在280 nm 处有惟一特征吸收峰。 3 ) 标准曲线绘制。分别移取上述原花色素标准 液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL 于10 mL 刻度试管中, 加入无水乙醇定容至10 mL , 塞紧后 充分摇匀, 得浓度分别为10 . 4 μg / mL 、20 . 8 μg / mL 、 31 . 2 μg / mL 、41 . 6 μg / mL 、52 . 0μg / mL 标准系列溶 液。在280 nm 处以无水乙醇作空白调零扣除背景 值, 测定标准系列溶液吸光值, ( 4 ) 原花色素含量测定。准确称取20 mg ( 精确至 0.1mg) 干葡萄籽提取物, 以无水乙醇定容至100 mL, ( 对于醇溶性较差的样品, 可加少量水溶解后再用无水 乙醇定容, 必要时以4 000 r / min 的转速离心10 min , 取上层清液2mL, 用无水乙醇稀释定容至10 mL) , 摇 匀, 按上述方法测定样品吸光度, 并依据标准曲线找 出对应的原花色素浓度, 计算原花色素纯度和提取率。